Reacciones colorimétricas para la detección de metabolitos secundarios

Una reacción colorimétrica es una técnica química en la que en una solución acuosa un sustrato reacciona con un reactivo para generar un cambio de color (producto).

Reación colorimétrica.

En fitoquímica es una técnica común utilizada para descubrir si una planta o algunas de sus estructuras presenta o no algún metabolito secundario.

A continuación te presento algunas de las pruebas y resultados de las mismas en Suaeda spp., los romeritos.

En general en todas las reacciones se colocan en tubos separados una pequeña cantidad de los extractos.

Se usa un tubo como control negativo (los reactivos de la reacción química) y otro tubo como control positivo (un sustrato del cual se tiene conocimiento que presenta un metabolito secundarios específico).

Prueba de ácidos fenólicos, a partir del reactivo de Folión-Ciocalteut. 

Control (+): Ácido gálico
Control (-): Los reactivos

Se añaden 0.5 ml de disolvente del cual se obtuvo el extracto (metanol, diclorometano o hexano). Se agregan 3 gotas del reactivo de Folin-Ciocalteut (1:3 en agua). Si la prueba resulta positiva las muestras se tornan a un color oscuro intenso.

Ácidos Fenólicos. Tubo Izquierdo C+. Tubo Derecho C-.

Prueba de flavonoides, a partir de Mg y Ácido Clorhídrico.

Control (+): Quercetina
Control (-): Reactivos

Se añade un tira de Mg y unas gotas de ácido clorhídrico. Si la reacción resulta positiva se presentará un coloración naranja y una reacción efervescente.

Flavonoides. Tubo Izquierdo C+. Tubo Derecho C-.

En esta reacción no se aprecia la presencia de flavonoides debido a que las muestras presentaban una coloración verde intensa. Pero si se puede notar que hubo efervescencia.

Prueba para taninos, a partir de Cloruro Férrico (III).

Control (+): Ácido tánico
Control (-): Reactivos

Se añade 0.5 ml de agua destilada. Se agita y se agregan unas gotas de Cloruro Ferrico (III) a 5% en agua. Si la prueba resulta positiva las muestras se tornarán a una coloración oscura intensa.

Taninos. Tubo Derecho C+. Tubo Izquierdo C-.

Prueba de terpenos (Liebermann).

Control (+): Ácido masticadenóico
Control (-): Reactivos.

Se agrega 1 ml de diclorometano, después 2 o 3 gotas de anhídrido acético y finalmente 2 o 3 gotas de ácido sulfúrico concentrado de tal forma que resbale por las paredes del tubo. Si la prueba resulta positiva se presenta coloración ámbar.

Terpenos. Tubo Derecho C+/ Tubo Izquierdo C-.

Prueba de alcaloides, a partir de reactivo Dragendorff.

Control (+): Lupinus spp.
Control (-): Reactivos

Se añade 2 ml de ácido clorhídrico a 1% en agua en cada tubo. Se coloca en baño caliente 20 minutos. Se dejan enfriar, y se agregan 3 gotitas de reactivo Dragendorff. Si la prueba resulta positiva se desarrollará un color naranja.

Alcaloides. Tubo Derecho C+´- Tubo Izquierdo C-.

No hay presencia de alcaloides debido que no se dió la reacción anaranjada característica.

Prueba para Saponinas, a partir de agitación. 

Control (+): Saponina de soya
Control (-): Reactivos

Se agrega 1 ml de agua y se agita durante un minuto. La prueba es positiva si se aprecia espuma y esta perdura más de un minuto.

Saponinas. Tubo Derecho C+. Tubo Izquierdo. 

No se aprecia la presencia de espuma.

Otra forma de detectar saponinas es a partir del reactivo de Fehling. Se agregan 0.5 ml de la solución A+B del reactivo de Fehling en cada tubo, después 0.5 ml de carbonato de sodio a 5% en agua. Se coloca en baño caliente durante 30 minutos. La prueba resulta positiva si se produce una precipitación rosada.

Saponinas Bursera fagaroides. Tubo Izquierdo C+- Tubo Sigueinte C-.

Algunas consideraciones:

• Antes de hacer las pruebas se debe obtener los extractos de la plantas a partir de disolventes de diferente polaridad como hexano, diclorometano y metanol.
• En algunos casos se necesitan técnicas específicas para la obtención de los extractos dependiendo con la planta o estructura con la que trabajes.
• Para rectificar la presencia de algún metabolito secundario es recomendable hacer otro tipo de pruebas.

Literatura citada:
Soto, H. M. 2014. Notas del curso de Fitoquímica. Campus Montecillo. Colegio de Postgraduados. Montecillo, Texcoco. Edo de Méx. 190 p.
Si quiere saber sobre disolventes consulte: http://www.ub.edu/talq/es/node/197